實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水中總大腸菌群的三種方法比較分析

　　現(xiàn)在人們對(duì)于生活飲用水的水質(zhì)要求逐漸提高，水資源的污染問題也成為關(guān)注焦點(diǎn)。為預(yù)防水中微生物對(duì)人體健康造成威脅，我國會(huì)對(duì)生活飲用水進(jìn)行嚴(yán)格的檢驗(yàn)檢測(cè)，其中水中總大腸菌群的檢測(cè)是非常重要的一項(xiàng)。

　　飲用水中的總大腸菌群主要是指大腸桿菌、大腸菌群和糞大腸菌群三大類型細(xì)菌共同組成的大腸菌群。水中大腸菌群數(shù)的多少，表明水體被糞便污染的程度，并間接表明腸道致病菌存在可能性的大小，因此，總大腸菌群是評(píng)價(jià)飲用水水質(zhì)的重要指標(biāo)。目前實(shí)驗(yàn)室常用的水中總大腸菌群檢測(cè)方法主要有多管發(fā)酵法、濾膜法、酶底物法等，下面優(yōu)爾普儀器結(jié)合實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)對(duì)三種方法進(jìn)行簡單的分析。

實(shí)驗(yàn)室水中總大腸菌群三種檢測(cè)方法比較分析

方法一：濾膜法

　　濾膜法是用孔徑為0.45微米的微孔濾膜過濾水樣，將濾膜貼在添加乳糖的選擇性培養(yǎng)基上，然后在37℃的環(huán)境下培養(yǎng)24小時(shí)，培養(yǎng)基上能形成需氧和兼性厭氧的革蘭陰性無芽孢桿菌，計(jì)算濾膜上生長的總大腸菌群數(shù)，以100ml水樣中總大腸菌群數(shù)作為報(bào)告結(jié)果。

　　濾膜法選擇的檢測(cè)培養(yǎng)基一般有m-Endo型培養(yǎng)基和Tergitol-TTC型培養(yǎng)基兩種，前者可在培養(yǎng)基上形成帶有金屬光澤的紅色菌落，后者可形成橙黃色的菌落。

濾膜法優(yōu)點(diǎn)：可定量計(jì)數(shù)，無干擾因素下的準(zhǔn)確性較高。

濾膜法缺點(diǎn)：對(duì)于在處理工程中因?yàn)榛瘜W(xué)和物理因素引起的大腸菌群非致死性損傷，無法在培養(yǎng)基上形成菌落;實(shí)驗(yàn)周期長，通常需要2到3天;特異性不高，結(jié)果易受水樣中其他細(xì)菌的影響，假陽性高，需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

方法二、多管發(fā)酵法

　　多管發(fā)酵法是將水樣進(jìn)行10倍稀釋，然后分別接種到乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，在35℃的環(huán)境中培養(yǎng)48小時(shí)，觀察細(xì)菌的生長情況。將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美籃瓊脂平板上，進(jìn)行分離培養(yǎng)，并通過革蘭染色、鏡檢等步驟進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果通過MPN檢索表即可查到100ml水樣中總大腸菌群的可能數(shù)值。

多管發(fā)酵法優(yōu)點(diǎn)：適用于檢測(cè)大面積的水樣;實(shí)驗(yàn)方法成本較低;對(duì)操作人員專業(yè)素養(yǎng)要求不高，經(jīng)過微生物學(xué)基本培訓(xùn)的技術(shù)人員即可操作;可檢測(cè)濁度較大的水樣。

多管發(fā)酵法缺點(diǎn)：若存在非大腸菌群細(xì)菌的干擾，無法準(zhǔn)確定量;實(shí)驗(yàn)周期較長，通常需要96小時(shí)以上;通過MPN表檢索并計(jì)算得出大概的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可能造成漏檢，精確性一般。

方法三：酶底物法

　　酶底物法是今年剛寫入國標(biāo)的水質(zhì)大腸菌群檢測(cè)方法，其具體操作步驟如下：

　　用100ml定量瓶量取100ml水樣(若水樣污染嚴(yán)重時(shí)可進(jìn)行稀釋)，加入專用的酶底物檢測(cè)試劑，蓋上瓶蓋，輕輕搖晃均勻使其溶解。將混合均勻的溶液倒入定量孔板中，然后放進(jìn)程控定量封口機(jī)進(jìn)行隨機(jī)分配和加熱封口。將封過口的定量孔板放在培養(yǎng)箱中，溫度設(shè)定為36℃，培養(yǎng)24小時(shí)。培養(yǎng)完成后，孔格顯示為黃色即為陽性，無色或顯色明顯淺于陽性色盤的為陰性，計(jì)算黃色孔格數(shù)并查詢對(duì)照51MPN表或97MPN表，結(jié)果即為100ml水樣中大腸菌群的含量，若水樣進(jìn)行稀釋，表格結(jié)果乘上稀釋倍數(shù)即為實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

酶底物法100ml水樣定量瓶

酶底物法定量檢測(cè)孔板

酶底物法優(yōu)點(diǎn)：檢測(cè)范圍大，100ml水樣中可檢出1-2419個(gè)目標(biāo);可精確檢出100ml水樣中的單個(gè)細(xì)菌，假陰性低;酶底物試劑可抑制上百萬個(gè)異養(yǎng)細(xì)菌，假陽性低;準(zhǔn)確性高，無需驗(yàn)證實(shí)驗(yàn);實(shí)驗(yàn)周期短，時(shí)間不超過24小時(shí);操作簡單，培訓(xùn)一次就能輕松使用;適用于大量樣品的批量快速檢測(cè)。

酶底物法缺點(diǎn)：需要購買程控定量封口機(jī)和酶底物試劑，相對(duì)來說成本稍微高一些。

　　以上就是對(duì)濾膜法、多管發(fā)酵法、酶底物法檢測(cè)水中總大腸菌群的簡單介紹和比較分析，從中可以看出的是，酶底物法作為國標(biāo)中新推出的檢測(cè)方法，有著較多的優(yōu)勢(shì)，除了能滿足基本的實(shí)驗(yàn)要求外，也減少了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，能應(yīng)對(duì)突發(fā)的事件，彌補(bǔ)了早前兩種方法的不足，這里優(yōu)爾普儀器建議有條件的實(shí)驗(yàn)室配置使用。